Métodos de macro dilución:
Utiliza 8 a 10 concentraciones decrecientes de
una antibiótico en caldo Mueller-Hinton en tubos de vidrio (macro dilución en caldo) o cajas de Petri con
agar Mueller-Hinton (dilución
en agar). A cada dilución se le agrega un inóculo bacteriano ajustado a la
escala 0.5 de McFarland. Se incuba durante 18-24 horas a 35 °C y se determina la CIM mediante
la observación de la menor dilución del antibiótico en la que se observa
inhibición del crecimiento visible bacteriano.
Métodos de microdilución
El procedimiento es similar al de macrodilución. Se
realiza utilizando un plato con micropozos
realizando 8 a 10 diluciones en caldo a las que se les adiciona un inóculo
bacteriano estandarizado (concentración final en cada pozo 5 x 105 UFC/mL).
Este método tiene la ventaja de utilizar pequeños volúmenes de los materiales
empleados.
Concentración
Bactericida Mínima(CBM)
Para determinar la CBM se determina
el número total de colonias en el control de crecimiento (sin antibiótico). A
partir de este valor se realiza el cálculo de la CMB. Por ejemplo si el conteo
del control de crecimiento es 6,2 x 105 UFC/mL,
entonces calculo: 6,2 x 105 UFC/mL X
0.1mL X 0.001 = 62 UFC, entonces ≤62 UFC indican la eliminación de ≥99.9% del
inóculo (MBC). µL del contenido de los pozos o tubos del método de
dilución (macro o micro) donde no se observa crecimiento visible bacteriano. Se
incuba a 35°C durante 24 horas en el caso de Gram negativos, 48 horas Staphylococcus spp.
y Streptococcus spp. y
72 horas para el resto de microorganismos.
Curva de crecimiento
Crecimiento: Se define crecimiento como un aumento en la cantidad de
constituyentes y estructuras celulares, cuando hay crecimiento en ausencia de
división celular hay aumento en el tamaño y peso de la célula. Mientras que
cuando el crecimiento es seguido de división celular hay un aumento en el
número de células.
La velocidad de crecimiento exponencial se expresa
como tiempo de generación (G) y este se define como el tiempo que tarda una
población en duplicarse. Los tiempos de generación varían ampliamente entre los
microorganismos, algunos crecen rápidamente y presentan tiempos de generación
de unos 30 minutos y otros tienen tiempos de generación de varias horas o
incluso días.
Fase de latencia
Cuando una población bacteriana es inoculada en medio
fresco, el crecimiento usualmente no comienza de inmediato sino después de un
tiempo llamado de latencia, que puede ser corto o largo dependiendo de las
condiciones.
Fase exponencial o fase
logarítmica
Es el período de la curva de crecimiento en el cual el
microorganismo crece exponencialmente, es decir que cada vez que pasa un tiempo
de generación la población se duplica. Bajo condiciones apropiadas la velocidad
de crecimiento es máxima. Las condiciones ambientales (temperatura, composición
del medio de cultivo, etc.) afectan a la velocidad de crecimiento exponencial.
Fase estacionaria
En cultivos en recipientes cerrados una población no
puede crecer indefinidamente en forma exponencial. Las limitaciones del crecimiento
ocurren ya sea por agotamiento de algún nutriente esencial, por acumulación de
productos tóxicos, porque se alcance un número de células elevado para el
espacio disponible o por una combinación de las causas anteriores.
Fase
de muerte
Si la incubación continúa después de que una población
microbiana alcanza la fase estacionaria, las células pueden seguir vivas y
continuar metabolizando, pero va a comenzar una disminución progresiva en el
número de células viables y cuando esto ocurre se dice que la población ha
entrado en fase de muerte.
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